lb培养基的配方(100mlLB培养基加多少氨苄)

1.玻璃器皿的清洗

在配制培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角烧瓶、培养皿、烧杯、吸管等。使用前，这些用具应根据不同情况进行处理和清洗。有些要包装消毒后才能使用。

1.新买的玻璃器皿

去除包装上的污染污垢后，先用热肥皂水擦洗，再用流水冲洗，然后用1 ~ 2%的工业盐酸浸泡数小时，去除游离的碱性物质，再用流水冲洗。容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入少许浓盐酸，旋转容器使其内表面沾有盐酸，几分钟后倒掉盐酸，再用流水冲洗干净，倒置在洗涤架上用水空擦干，即可使用。

2.用过的玻璃器皿

凡是没有致病菌或未被细菌污染的器皿，用后可随时清洗，吸附了化学试剂的吸管可先用清水浸泡，一定量后再清洗。可能被致病菌污染的容器必须适当消毒，去除污垢，用肥皂溶液清洗，然后用流动水冲洗。如果不能用皂液清洗的器皿，可以用洗液浸泡适当时间，然后用清水清洗。洗涤液的主要成分是重铬酸钾和浓硫酸，其作用是将有机物氧化成可溶物质进行洗涤。乳液有很强的腐蚀作用，使用时要小心，避免溅到衣服、身上和其他物品上。

二、培训基地的类型

任何在实验室中配制的，适合微生物生长繁殖或代谢产物积累的营养培养基，称为培养基。由于各种微生物的营养需求不同，培养目的不同，检测要求不同，培养基种类繁多。根据一定的标准，我们可以把种类繁多的培养基分成几种类型。

1.根据对培养基化学成分的完整认识，培养基可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。

1)天然培养基天然培养基是指使用各种动物、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。用作这种培养基的主要原料有:牛肉酱、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种蛋糕粉、土豆、牛奶、血清等。虽然我们无法确切知道由这些物质制成的培养基的化学成分，但一般来说，这种培养基营养丰富，微生物生长旺盛，来源广泛，配制方便，所以常用，特别适合配制实验室常用的培养基。这种培养基的稳定性经常受到制造商或批号等因素的影响。

2)合成培养基合成培养基是一种化学成分和数量完全已知的培养基。它由化学成分已知的化学物质制成。这种培养基化学成分精确，重复性强，但价格昂贵，微生物生长缓慢，只适合营养、代谢等科学研究。

3)半合成培养基，在合成培养基中加入一种或几种天然成分；或者在天然培养基中添加一种或多种成分已知的化学物质，形成半合成培养基。如马铃薯蔗糖培养基。这种培养基广泛用于生产实践和实验室。

2.根据培养基的物理状态，可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。

1)液体培养基配制的培养基为液体，其成分基本溶于水，无明显固体。液体培养基营养成分分布均匀，易于控制微生物的生长和代谢。

2)固体培养基。在液体培养基中加入适量的凝固剂，形成固体培养基。常用的凝固剂有琼脂、明胶、硅胶，其中以琼脂最常用。固体介质在实践中被广泛使用。在实验室中，用于杂菌的分离、鉴定、检验、微生物的计数、保存和生物测定。

3)半固体培养基如果在液体培养基中加入少量的凝固剂，就会制成半固体培养基。以琼脂为例，其用量在0.2~1%之间。这种培养基有时可用于观察微生物的动态，有时可用于保存菌株。

3.根据培养基的用途，可分为选择培养基、增殖培养基、鉴定培养基等。

1)选择性培养基在培养基中加入一种物质以杀死或抑制不需要的菌株生长的培养基称为选择性培养基。如链霉素、氯霉素等。抑制原核微生物的生长；然而，制霉菌素和灰黄霉素能抑制真核微生物的生长。结晶紫可以抑制革兰氏阳性菌的生长。

2)增殖培养基在自然界中，不同种类的微生物经常生活在一起。为了分离出我们需要的微生物，在普通培养基中加入某种微生物特别喜欢的一些营养物质，增加这种微生物的繁殖速度，逐渐消灭其他微生物。这种培养基称为增殖培养基，常用于菌种筛选和选择性富集。在某种程度上，增殖培养基也是一种选择性培养基。

3)鉴定培养基在培养基中加入一定的试剂或化学物质，使不可区分的微生物在培养后表现出明显的差异，从而有助于快速鉴定某些微生物。这种培养基被称为鉴定培养基。比如用于检查饮用水和乳制品中是否有肠道致病菌的伊红亚甲蓝培养基，就是一种常用的鉴别培养基。

有些媒体具有选择和识别的双重功能。比如食品检验常用的麦康凯培养基就是一个例子。它含有胆汁盐、乳糖和中性红。胆盐能抑制肠道细菌以外的细菌(选择性)。乳糖和中性红(指示剂)有助于区分发酵乳糖的肠道细菌(如大肠杆菌)和不能发酵乳糖的肠道致病菌(如沙门氏菌和志贺氏菌)。

另外，根据培养基的营养成分是否“完全”，可分为基础培养基、完全培养基和补充培养基。这些术语主要用于微生物遗传学。根据生产目的，培养基可分为种子培养基和发酵培养基。还有专门用于培养病毒等寄生微生物的活组织培养基，如鸡胚等。专门用于培养自养微生物的无机盐培养基等。

三。培养基制备的基本方法和注意事项

1.培养基配方的选择

同一种培养基的配方，在不同的作品中往往会有一些差异。因此，除采用标准方法外，应严格按照其规定进行制备。一般要尽量收集相关资料，比较核对，然后根据自己的使用目的进行选择，并记录其来源。

2.培养基制备记录

每次配制培养基时，应做好记录，包括培养基的名称、配方和来源、各种成分的品牌、最终pH值、消毒温度和时间、配制日期和配制人等。记录应当复制，原始记录应当保存备查。复制的记录应与配制好的培养基一起保存，以防混淆。

3.称量培养基的成分

培养基的各种成分必须准确称量，并应注意防止混淆。最好一次完成，不要中断。可以将配方放在旁边，将每种成分称重，并在匹配的方面做上标记，将待称重的药物一次性收集放在左侧，每次称重完毕后移至右侧。称重完全完成后，还应进行检查。

4.将培养基的成分混合并熔化。

培养基中使用的化学物质应该是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以免培养基中混入微量的铜或铁，使细菌难以生长。最好用不锈钢锅加热融化，或放入烧杯或烧瓶中，放入高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽灭菌器中蒸煮融化。当它在锅里融化后，可以用温水加热，随时扰动，防止结焦。如果发现结焦现象，介质不能使用，应重新配制。固体成分大部分熔化后，用小火将所有成分完全熔化，直至沸腾。对于琼脂溶解，用另一部分水溶解其他成分，然后将两种溶液充分混合。在加热和融化的过程中，蒸发损失的水分最终必须得到补充。

5.培养基pH值的初步调节

因为培养基的pH值在加热和消毒的过程中会发生变化，所以在培养基的所有成分完全溶解后，要对PH值进行初步调整。比如牛肉提取物可以降低pH0.2左右，但是肠道提取物的pH会明显升高。因此，对于这一步，操作者要时刻注意摸索经验，以便掌握培养基的最终PH值，保证培养基的质量。调节PH值后，培养基也应煮沸几分钟，以促进培养基中沉淀物的沉淀。

6.过滤并澄清培养基。

液体培养基必须绝对清澈，琼脂培养基也要透明无明显沉淀。因此，应采用过滤或其他澄清方法来满足这一要求。一般液体培养基可以用滤纸过滤，滤纸要折叠成折扇或漏斗状，避免因水压不均造成滤纸破损。

琼脂培养基可以趁热用干净的白色绒布过滤。也可以用双层纱布过滤，中间加一层薄薄的脱脂棉。制作鲜肉、肝、血、土豆等浸液时，一定要先用绒布过滤碎渣，再用滤纸反复过滤。如果过滤法不能满足澄清要求，必须使用蛋清澄清法。即把冷却到55 ~ 60℃的培养基放入大三角瓶中，装量不要超过烧瓶容量的1/2，每1000ml培养基加入1~2个蛋清，剧烈摇动3~5分钟，放入高压蒸汽灭菌器中，121℃加热20分钟，趁热取出用绒布过滤。

7.包装培养基。

根据使用目的和要求，培养基的分装应在试管、烧瓶和其他合适的容器中。分装量不得超过容器容量的2/3。容器口可以用垫有防潮纸的棉塞塞住，容器外面必须用防水纸包扎(目前试管一般用螺旋盖)。分装时最好使用半自动或电动定量包装机。琼脂斜面培养基分装时，分装量以形成2/3底层和1/3斜面为宜。包装容器应事先清洗干净并干燥灭菌，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应单独分装20ml，置于小玻璃瓶中培养，用该批培养基灭菌，以确定该批培养基的最终pH值。

8.培养基的灭菌

通常，培养基可以通过121℃的高压蒸汽灭菌15分钟。在各种培养基配制方法中，如果没有特殊规定，可采用此方法进行灭菌。

一些耐热成分，如糖类等，应单独配制成20%或更高的浓缩液，用分级灭菌法过滤或消毒，再用无菌技术定量加入培养基中。明胶培养基也应在较低的温度下灭菌。血液、体液、抗生素等。应通过无菌技术提取并加入到冷却至约50℃的培养基中。

琼脂斜面培养基灭菌后应立即取出，待冷却至55℃-60℃时，以适当的斜面放置，直至自然凝固。

9.培养基质量检验

每批培养基配制好后，都要仔细检查一遍。如发现有裂纹、浸水、色泽异常、棉塞被培养基污染等。，应该挑出来扔掉。并测量最终的pH值。

将所有培养基放入36±1℃培养箱中过夜培养，若有细菌生长则丢弃。

用相关标准菌株接种1~2管或2瓶培养基，培养24~48小时，如出现无菌生长或生长不良。应追查原因并重复接种。如果结果仍与之前相同，则该批培养基应废弃，不能使用。

10.培养基的保存

培养基应保存在阴凉避光的地方，最好放在普通冰箱里。存放时间不得超过一周，倒入的平板培养基不得超过三天。每批培养基必须附有该批培养基制备记录的辅助页或明显的标签。